——最适合天然产物的纯化,特别是嗜脂性分子纯化及制备Sephadex 葡聚糖凝胶通过表氯醇交联多个葡聚糖得到。葡聚糖与双官能团的表氯醇交联得到产品为G-10、G-25等。通过羟丙基化将Sephadex G转化为可在溶剂中溶涨的葡聚糖凝胶得到产品Sephardex LH-20。层析原理: 凝胶过滤--------依赖于分子的大小和形状 吸附层析-----依赖于被分离化合物与凝胶之间的氢键数量和质量 分配层析----------------依赖于被分离化合物在流动相(溶剂)和固定相(凝胶)之间的分配,这主要由样品的极性和溶剂的极性决定的。特点: 适合用溶剂分离嗜脂性分子,可以非常经济地大规模制备各种天然产物 结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身,分离结构非常相近的分子 载量可高达300mg样品/ml凝胶,极少需要再生,分离效果可保持十几年不变Sephadex LH-20性质
Sephadex LH-20性质和操作 | 干胶溶胀表 | ||
排阻极限 | 4-5KD(球蛋白) | 溶剂 | 溶胀体积(ml凝胶/g干胶粉末) |
上样量 | 取决于所需分辩率 | Dimethyl sulphoxide 二甲亚砜 | 4.4-4.6 |
尺寸排阻模式 | 小于总体积的20% | Pyridine 嘧啶 | 4.2-4.4 |
正相分配模式 | 小于总体积的1% | Water 水 | 4.0-4.4 |
胶粒形状 | 球形,多孔 | Dimethylformamide 二甲基甲酰胺 | 3.8-4.2 |
颗粒大小(干) | 18-111μm(直径) | Saline 生理盐水 | 3.9-4.1 |
颗粒大小中间值(干) | 70μm(直径) | Methanol 甲醇 | 3.8-4.1 |
颗粒大小(甲醇) | 27-163μm(直径) | Methane dichloride 二氯乙烷 | 3.8-4.1 |
颗粒大小中间值(甲醇) | 103μm(直径) | Chloroform 氯仿 | 3.8-4.1 |
线性流速 | 720cm/h | Proanol 丙醇 | 3.7-4.0 |
参考线性流速 | 60cm/h | Ethanol 乙醇 | 3.6-3.9 |
pH的稳定性 | Isobutanol异丁醇 | 3.6-3.9 | |
操作过程 | 2-11 | Formamide 甲酰胺 | 3.6-3.9 |
清洗过程 | 2-13 | Methylene dichloride 二氯甲烷 | 3.6-3.9 |
化学稳定性 | 在许多水溶液中稳定 | Butanol 丁醇 | 3.5-3.8 |
溶剂系统中稳定. | Isopropanol异丙醇 | 3.3-3.6 | |
高压灭菌 | Tetrahydrofuran 四氢呋喃 | 3.3-3.6 | |
高压灭菌 | 121 ℃, 20min | Dioxane 二氧杂环己烷 | 3.2-3.5 |
操作温度 | 4℃-40℃ | Acetone丙酮 | 2.4-2.6 |
保存条件 | Acetonitrile乙腈 | 2.2-2.4 | |
新填料 | 4-25℃ | Carbon tetrachloride 四氯化碳 | 1.8-2.2 |
使用后填料 | 4-8℃, pH6-8, 勿冷冻, | Benzene 苯 | 1.6-2.0 |
加入抑菌剂(如20%乙醇,0.04%叠氮钠) | Ethyl acetate乙酸乙酯 | 1.6-1.8 | |
Toluene甲苯 | 1.5-1.6 |